Favorgen FABGK100說明書

Favorgen位于中國(guó)臺(tái)灣國(guó)家生物技術(shù)園區(qū)。它通過自動(dòng)化系統(tǒng)建立了ISO合格工廠，
生產(chǎn)高質(zhì)量的分子生物學(xué)產(chǎn)品和臨床化學(xué)試劑。目前，F(xiàn)avorgen在美國(guó)，中國(guó)，韓國(guó)和丹麥設(shè)立分支機(jī)構(gòu)，并在30多個(gè)國(guó)家設(shè)立了分銷網(wǎng)絡(luò)。自成立以來(lái)，F(xiàn)avorgen已經(jīng)在其先進(jìn)的生產(chǎn)設(shè)施上投入了大量資金，以競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格為客戶提供高質(zhì)量的產(chǎn)品。Favorgen致力于通過與學(xué)術(shù)和行業(yè)合作伙伴的內(nèi)部和合作開展研究，以不斷提供高質(zhì)量的創(chuàng)新產(chǎn)品。

Favorgen FABGK100說明書

Nucleic-acids extraction Genomic DNA Extraction

核酸提取基因組DNA提取

Genomic DNA Extraction Blood DNA Mini / Midi / Maxi Kit

FavorPrep Genomic DNA Mini Kit (Blood/Cultured Cell)

Cat. No.:

FABGK 100 (100 Preps)

FABGK 300 (300 Preps)

RBC Lysis Buffer 135 ml 405 ml

FATG Buffer 30 ml 75 ml

FABG Buffer 40 ml 100 ml

W1 Buffer 45 ml 130 ml

2 ml Collection Tube 200 pcs 600 pcs

次打開時(shí)，加入100 ml/200 ml乙醇(96%~100%)到洗滌緩沖液中。

規(guī)格

樣本量：全血高達(dá)300μl

凍血可達(dá)200μl，布瓦毛可達(dá)200μl

培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞多可達(dá)1×10 7

培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞多可達(dá)1x109，真菌細(xì)胞可達(dá)5x107。

平均產(chǎn)量：約50μg格式：自旋柱

處理時(shí)間：60分鐘內(nèi)

重要事項(xiàng)

本系統(tǒng)中提供的緩沖區(qū)包含刺激物。在處理這些緩沖器時(shí)，戴上手套和實(shí)驗(yàn)室外套。

為了貓。沒有。FABGK 100，次打開時(shí)加入100 ml乙醇(96~100%)洗滌緩沖液。為了貓。沒有。FABGK 300，加入200毫升乙醇(96~100%)，次打開時(shí)加入洗滌緩沖液。

在試管中加入200μ1的FATG緩沖液，再用旋渦或圓孔法重新懸浮細(xì)胞球團(tuán)。

在室溫下孵育5分鐘，然后從第2步(細(xì)胞溶解)開始遵循培養(yǎng)的細(xì)胞協(xié)議。

發(fā)現(xiàn)并修理故障，解決紛爭(zhēng):

低產(chǎn)量

使用了太多的細(xì)胞

-減少樣本量。

蛋白酶K活性不足導(dǎo)致細(xì)胞溶解不良

-使用新鮮或保存良好的蛋白酶K庫(kù)存溶液。

由于與FABG緩沖液混合不足，細(xì)胞溶解能力差

-用脈沖渦旋法將樣品和光纖光柵緩沖液立即*混合。

細(xì)胞溶解能力差，原因是培養(yǎng)時(shí)間不足

-延長(zhǎng)孵化時(shí)間，確保沒有殘留的微粒。

在轉(zhuǎn)入fbg midi柱之前，未將乙醇加入裂解液中。

當(dāng)次打開時(shí)，乙醇不會(huì)加入到洗滌緩沖液中；在加入洗滌緩沖液之前，乙醇的體積或百分比是不正確的。

基因組DNA的洗脫是無(wú)效的

-確保ddH2O的pH值在7.5-8.5之間。

-加入萃取緩沖液或ddH2O后，在離心前將FABG MIDI柱放置5~10 min。

血樣中含有血疙瘩

-將血樣與抗凝血?jiǎng)┗旌希乐寡ㄐ纬伞?/span>

樣品太粘稠

-減少樣本量。

純化的dna在下游應(yīng)用中表現(xiàn)不佳。

樣品是舊的

-總要使用新鮮或保存完好的樣本提取基因組DNA。

乙醇?xì)埩粑廴?/span>

--在洗滌步驟之后，在4000xg下離心10分鐘以干燥FabgMIDI柱。

RNA污染

特別協(xié)議：(針對(duì)細(xì)菌)步驟1-樣品準(zhǔn)備

革蘭陰性菌：

將適當(dāng)數(shù)量的細(xì)菌細(xì)胞(多可達(dá)1×10 9)轉(zhuǎn)移到1.5ml微離心管(未提供)并全速離心

(14，000 rpm或10，000 x g)1分鐘。然后丟棄上清液。

加入2 0 0μ1的FATG緩沖液，再用旋渦或管狀再懸浮球團(tuán)。室溫下孵育5分鐘。

從第二步開始遵循培養(yǎng)的細(xì)胞協(xié)議(細(xì)胞溶解)。

革蘭陽(yáng)性細(xì)菌：

將適當(dāng)數(shù)量的細(xì)菌細(xì)胞(多可達(dá)1×10 9)轉(zhuǎn)移到1.5ml微離心管(未提供)并全速離心

(14，000 rpm或10，000 x g)1分鐘。然后丟棄上清液。

加入200μ1的溶菌酶緩沖液(20 mg/ml溶菌酶；20 mm Tris-HCl；2 mm EDTA；1%TritonX-100，pH 8.0；制備新鮮溶菌酶緩沖液)。

在使用前)，再用旋渦或管道將球團(tuán)重新懸浮。

室溫下孵育10分鐘。在孵化過程中，每2-3分鐘倒置一次.

從第二步開始遵循培養(yǎng)的細(xì)胞協(xié)議(細(xì)胞溶解)。

特別議定書：(用于真菌)

步驟1-樣品準(zhǔn)備

收集適當(dāng)數(shù)量的真菌細(xì)胞(多5×10 7)至1.5ml微離心管(未提供)，離心機(jī)為5 000 x g

10分鐘。然后丟棄上清液。

加入6 0 0μ1的山梨醇緩沖液(1.2 M山梨醇；10 mm CaCl 2；

0.1mTris-HCl，pH7.5；35 mm-巰基乙醇)，并重新懸浮顆粒。

添加200 U的裂解酶或酶解酶。在30℃時(shí)孵育30分鐘。

將混合物在2，000 x克離心10分鐘，取出球體，然后移除上清液。

一般性議定書：

在開始以下步驟之前，請(qǐng)閱讀重要說明。

第1步-紅細(xì)胞溶解

在抗凝治療收集管中收集新鮮人血。

將300μl新鮮血液轉(zhuǎn)移到1.5ml微離心管(未提供)。如果樣品超過300μl(可達(dá)1毫升)，將樣品加入無(wú)菌15毫升離心管。

加入3倍紅細(xì)胞溶解緩沖液樣品體積，倒置混合。不要漩渦。

室溫下孵育10分鐘。

3，000 x g離心5分鐘，*取出上清液。

用1 0 0μ1的紅細(xì)胞裂解緩沖液復(fù)蘇球團(tuán)。

步驟2-細(xì)胞溶解

加入200μl的光纖光柵緩沖器，并通過渦流混合。

在室溫下孵育10分鐘，或直到樣品溶解液清澈為止。在孵化過程中，每隔3分鐘倒置一次管子。

預(yù)熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟5)。

(可選步驟)：如果需要無(wú)RNA的基因組DNA，在樣品中加入5μl 10 mg/mlRNase A，然后用渦流混合。在室溫下孵育5分鐘。

步驟3-綁定

在樣品中加入200μl乙醇(96%~100%)，攪拌10秒。(如果有任何沉淀物，就會(huì)噴出。)

將FABG柱放置到2ml收集管上。將樣品混合物(包括任何沉淀物)仔細(xì)轉(zhuǎn)移到FABG柱。離心機(jī)

全速5分鐘(14，000轉(zhuǎn)或10，000克)并丟棄2毫升收集管。將FABG列放置在一個(gè)新的2ml收集管中。

(適用于新鮮血液)

特別議定書：(用于培養(yǎng)細(xì)胞)

步驟1-樣品準(zhǔn)備

培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞：

在收獲前使貼壁細(xì)胞變小。

將適當(dāng)數(shù)量的細(xì)胞(至多1×10 7)轉(zhuǎn)移到1.5ml微離心管(未提供)，并以6 000 x g離心20秒。

取上清，用150μ1紅細(xì)胞溶解緩沖液重新懸浮。然后按照步驟2(細(xì)胞溶解)。

新鮮血液(人血除外)：

哺乳動(dòng)物血液的樣本體積(無(wú)核)可以是

有核紅細(xì)胞(如鳥類或魚類)的樣品體積可達(dá)10μl。

將150μ1的FATG緩沖液和血樣放入1.5ml微離心管(未提供)。按旋渦混合，然后按照步驟2(細(xì)胞溶解)進(jìn)行。

步驟2-細(xì)胞溶解

加入200μl的光纖光柵緩沖器到樣品和漩渦5秒。

在70℃下孵育10分鐘，或直到樣品溶解液清澈為止。在孵化過程中，每隔3分鐘倒置一次管子。

預(yù)熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟5)。

(可選步驟)：如果需要無(wú)RNA的基因組dna，添加5μl

RNase A濃度為10 mg/ml，用旋渦混合。在室溫下孵育5分鐘。

從步驟3(綁定)開始遵循“一般協(xié)議”。

步驟4-綁定

在樣品中加入250μl乙醇(96%~100%)，攪拌10秒。(如果有任何沉淀物，就會(huì)噴出。)

將FABG柱放置到2ml收集管上。將樣品混合物(包括任何沉淀物)轉(zhuǎn)移到FABG柱。離心機(jī)5分鐘

全速(每分鐘14，000轉(zhuǎn)或10，000克)并丟棄2毫升的收集管。將FABG列放置在一個(gè)新的2ml收集管中。

步驟5-清洗

用400μl W1緩沖液清洗光纖光柵柱。離心機(jī)1分鐘

全速(14，000轉(zhuǎn)或10，000 x克)并丟棄流過.

將FABG柱放回2ml收集管中。用600μl洗滌緩沖液(添加乙醇)清洗光纖光柵柱。全速離心1分鐘(每分鐘14，000轉(zhuǎn)或10，000克)，并丟棄流動(dòng)節(jié)流閥。 Ghana 加納.

-確保乙醇在次打開時(shí)加入到洗滌緩沖液中。

將FABG柱放回2ml收集管中。離心機(jī)

全速增加3分鐘(14，000轉(zhuǎn)或10，000克)干燥柱。

-重要的一步！這一步將避免殘留的液體來(lái)抑制后續(xù)的酶促反應(yīng)。

步驟6-釋放

將干燥的FABG柱放置在新的1.5ml微離心管上。

將預(yù)熱排液緩沖液或TE的100μ1加入到FABG柱膜中心。

-重要的一步！若要進(jìn)行有效洗脫，請(qǐng)確保洗脫液為

分散在膜中心，*吸收。

將FAGB欄在37 C處孵育10分鐘。

全速離心1分鐘(14，000轉(zhuǎn)或10，000克)，以躲避DNA。

-標(biāo)準(zhǔn)洗脫體積為100μl。如果需要更高的dna產(chǎn)量，重復(fù)dna。

洗脫步驟可提高DNA的回收率，總體積可達(dá)2 0 0μ1。

步驟終-純dna

將DNA片段存儲(chǔ)在4℃或-20℃

第4步-清洗

用400μl W1緩沖液清洗光纖光柵柱。離心30秒

全速(14，000轉(zhuǎn)或10，000 x克)并丟棄流過.

將FABG柱放回2ml收集管中。用600μl洗滌緩沖液(添加乙醇)清洗光纖光柵柱。全速離心30秒(每分鐘14，000轉(zhuǎn)或10，000克)，然后丟棄- 通過，穿過.

-確保乙醇在次打開時(shí)加入到洗滌緩沖液中。

將FABG柱放回2ml收集管中。離心機(jī)

全速增加3分鐘(14，000轉(zhuǎn)或10，000克)干燥柱。

-重要的一步！這一步將避免殘留的液體來(lái)抑制后續(xù)的酶促反應(yīng)。

第5步-逃避

將干燥的FABG柱放置在新的1.5ml微離心管上。

特別議定書：(適用于冰凍血液)

步驟1-樣品準(zhǔn)備

將多達(dá)200μl的血液轉(zhuǎn)移到1.5ml微離心管(未提供)。如果樣本容量小于200μl，則添加適當(dāng)?shù)膒bs卷。

在樣品中加入30μl蛋白酶K(10 mg/ml)，并進(jìn)行簡(jiǎn)單混合。然后在60℃孵育15分鐘。

步驟2-細(xì)胞溶解

加入200μl光纖光柵緩沖器到樣品中，用渦流混合。

在70℃水浴中孵育15分鐘，將樣品溶解。在孵化過程中，每3分鐘倒置一次樣品。

預(yù)熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟5)。

(可選步驟)：如果需要無(wú)RNA的基因組DNA，在樣品中加入5μl 10 mg/mlRNase A，然后用渦流混合。在室溫下孵育5分鐘。

從步驟3(綁定)開始遵循“一般協(xié)議”。

特別議定書：(為Buffy Coat)

步驟1-樣品準(zhǔn)備

將全血在3，300 xg下離心10分鐘，在室溫下可得到三個(gè)不同的組分：上清層為血漿；

中間層是布菲膜，含有濃縮的白細(xì)胞；底層是濃縮的紅細(xì)胞。從布菲皮毛中提取總dna將產(chǎn)生比dna高出5-10倍的DNA。 一個(gè)等價(jià)

全血的體積。

第2步-紅細(xì)胞溶解

將多達(dá)200μl的布菲大衣轉(zhuǎn)移到1.5ml的微離心管中(未提供)。

加入3倍紅細(xì)胞溶解緩沖液樣品體積，倒置混合。

室溫下孵育10分鐘。在孵化過程中，每隔3分鐘倒置一次管子。

全速離心1分鐘(14，000轉(zhuǎn)或10，000克)，*除去上清液。

用5 0 0μ1的紅細(xì)胞裂解緩沖液對(duì)球團(tuán)進(jìn)行復(fù)蘇。然后以全速離心1分鐘(14，000轉(zhuǎn)或10，000克)，*除去上清液。

用紅細(xì)胞裂解緩沖液2 0 0μl復(fù)蘇球團(tuán)。(僅用旋渦將管子混合。確保球團(tuán)*重新掛起，否則在處理綁定步驟時(shí)將阻止列)。

步驟3-細(xì)胞溶解

在樣品中加入250μ1的光纖光柵緩沖液，通過渦流混合。

在室溫下孵育30分鐘，或直到樣品溶解液清澈為止。在孵化過程中，每隔3分鐘倒置一次管子。

預(yù)熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟6)。

(可選步驟)：如果需要無(wú)RNA的基因組DNA，在樣品中加入5μl 10 mg/mlRNase A，然后用渦流混合。在室溫下孵育5分鐘。

基因組DNA提取血液DNA Mini / Midi / Maxi試劑盒

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