• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

帕斯夸爾，G.，等。(2018)。“通過細胞間酶標記監測體內 T 細胞-樹突細胞相互作用。" 自然 553(7689)：496-500。

不同細胞類型之間的相互作用對于多種生物過程至關重要，包括免疫、胚胎發育和神經元信號傳導。盡管可以通過活體顯微鏡在體內監測細胞間相互作用的動態，但這種方法不能提供有關受體和配體的任何信息，也不能分離相互作用的細胞以進行下游分析。在這里，我們描述了一種互補方法，該方法使用細菌分選酶 A 介導的跨免疫細胞突觸的細胞標記來識別活體小鼠細胞之間的受體-配體相互作用，方法是產生隨后可以通過流式細胞術在體外檢測到的信號。我們將這種用于標記免疫細胞之間“親吻和奔跑"相互作用的方法稱為“通過 SorTagging 細胞間接觸標記免疫伙伴關系"（LIPSTIC）。使用 LIPSTIC，我們表明在體內 T 細胞啟動期間樹突狀細胞和 CD4(+) T 細胞之間的相互作用以兩種不同的方式發生：早期的同源階段，在此期間，CD40-CD40L 相互作用特異性地發生在 T 細胞和抗原之間。加載樹突狀細胞；以及后來的非同源階段，在此期間，這些相互作用不再需要 T 細胞受體的事先參與。因此，LIPSTIC 能夠直接測量體外和體內的動態細胞間相互作用。鑒于其與不同受體-配體對和一系列可檢測標記一起使用的靈活性，

• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

敬畏，O.，等。(2015)。“T 濾泡輔助細胞中的 PU.1 表達限制了 CD40L 依賴性生發中心 B 細胞的發育。" J免疫學。

PU.1 是一種 ETS 家族轉錄因子，對多種造血細胞譜系的發育很重要。以前的工作證明了 PU.1 在促進 Th9 發育和限制 Th2 細胞因子產生方面的關鍵作用。PU.1 在其他 Th 譜系中是否具有功能尚不清楚。在這項研究中，我們檢查了 PU.1 在 CD4+ T 細胞中異位表達的影響，并觀察到與 T 濾泡輔助 (Tfh) 細胞功能相關的基因表達降低，包括 Il21 和 Tnfsf5（編碼 CD40L）。來自在 T 細胞中缺乏 PU.1 表達的條件性突變小鼠的 T 細胞 (Sfpi1lck-/-) 證明體外 CD40L 和 IL-21 的產生增加。在佐劑依賴性或佐劑非依賴性免疫后，我們觀察到 Sfpi1lck-/- 小鼠的 Tfh 細胞數量增加，生發中心 B 細胞（GCB 細胞）增加，體內抗體產量增加。與對照小鼠相比，這與來自 Sfpi1lck-/- 小鼠的 Tfh 細胞中 IL-21 和 CD40L 的表達增加相關。最后，雖然阻斷 IL-21 不會影響 Sfpi1lck-/- 小鼠中的 GCB 細胞，但免疫 Sfpi1lck-/- 小鼠的抗 CD40L 治療降低了 GCB 細胞數量和 Ag 特異性 Ig 濃度。總之，這些數據表明 PU.1 在 Tfh 細胞、生發中心和 Tfh 依賴性體液免疫的功能中具有抑制作用。免疫的 Sfpi1lck-/- 小鼠的抗 CD40L 治療降低了 GCB 細胞數量和 Ag 特異性 Ig 濃度。總之，這些數據表明 PU.1 在 Tfh 細胞、生發中心和 Tfh 依賴性體液免疫的功能中具有抑制作用。免疫的 Sfpi1lck-/- 小鼠的抗 CD40L 治療降低了 GCB 細胞數量和 Ag 特異性 Ig 濃度。總之，這些數據表明 PU.1 在 Tfh 細胞、生發中心和 Tfh 依賴性體液免疫的功能中具有抑制作用。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

布拉塞特，J.，等。(2015)。“在可逆性結腸炎的新小鼠模型中，疾病的發展和維持都需要 CD4 T 細胞。" 粘膜免疫學。doi：10.1038/mi.2015.93。

目前治療炎癥性腸病的療法療效有限，副作用顯著，并且通常會隨著時間的推移而減弱。關于在結腸炎粘膜愈合過程中起作用的細胞和分子機制知之甚少。為了研究此類事件，我們開發了一種新的可逆性結腸炎模型，其中將 CD4+CD45RBhi T 細胞過繼轉移到傷寒桿菌定植的淋巴細胞減少小鼠中，導致結腸炎癥的快速發作，而這種炎癥可通過消耗致結腸炎 T 細胞來逆轉。緩解與臨床和組織病理學評分的改善、腸粘膜免疫細胞浸潤減少、腸道基因表達譜改變、結腸粘液層再生以及上皮屏障完整性的恢復有關。尤其，致結腸炎 T 細胞不僅對結腸炎的誘導至關重要，而且對疾病的維持也很重要。致結腸炎 T 細胞的消耗導致腫瘤壞死因子 α (TNFα) 水平迅速下降，這與炎癥免疫細胞對炎癥部位的浸潤減少有關。雖然中和 TNFalpha 阻止了結腸炎的發作，但對患有已確定疾病的小鼠進行抗 TNFalpha 治療未能解決結腸炎癥。總的來說，這種可逆性結腸炎的新模型為研究慢性腸道緩解-復發性疾病的粘膜愈合動力學提供了重要的研究工具。致結腸炎 T 細胞的消耗導致腫瘤壞死因子 α (TNFα) 水平迅速下降，這與炎癥免疫細胞對炎癥部位的浸潤減少有關。雖然中和 TNFalpha 阻止了結腸炎的發作，但對患有已確定疾病的小鼠進行抗 TNFalpha 治療未能解決結腸炎癥。總的來說，這種可逆性結腸炎的新模型為研究慢性腸道緩解-復發性疾病的粘膜愈合動力學提供了重要的研究工具。致結腸炎 T 細胞的消耗導致腫瘤壞死因子 α (TNFα) 水平迅速下降，這與炎癥免疫細胞對炎癥部位的浸潤減少有關。雖然中和 TNFalpha 阻止了結腸炎的發作，但對患有已確定疾病的小鼠進行抗 TNFalpha 治療未能解決結腸炎癥。總的來說，這種可逆性結腸炎的新模型為研究慢性腸道緩解-復發性疾病的粘膜愈合動力學提供了重要的研究工具。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

康德，P.，等。(2015)。“DC-SIGN(+) 巨噬細胞控制移植耐受的誘導。" 豁免權 42(6)：1143-1158。 

單核細胞譜系的組織效應細胞可以根據其環境分化為具有特定細胞功能的不同細胞類型。介導移植耐受誘導的免疫保護性巨噬細胞的表型、發育要求和功能機制仍然難以捉摸。在這里，我們證明共刺激有利于抑制 CD8(+) T 細胞免疫并促進 CD4(+) Foxp3(+) Treg 細胞擴增的表達 DC-SIGN 的巨噬細胞的積累。從機制上講，巖藻糖基化配體和 TLR4 信號傳導的同時 DC-SIGN 參與是產生與延長同種異體移植物存活相關的免疫調節 IL-10 所必需的。在體內刪除表達 DC-SIGN 的巨噬細胞，干擾其 CSF1 依賴性發育，或阻止 DC-SIGN 信號通路消除耐受性。總之，這些結果為共刺激阻斷的致耐受效應提供了新的見解，并將 DC-SIGN(+) 抑制性巨噬細胞鑒定為免疫耐受的關鍵介質，并伴隨臨床治療意義。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

米勒，ML 等。(2015)。“急性排斥后移植耐受性的自發恢復。" 國家通訊社 6：7566。

移植是治療終末期器官衰竭的一種方法，但在沒有藥物免疫抑制的情況下，同種異體器官會被急性排斥。這種排斥總是導致同種異體致敏和二級供體匹配移植物的加速排斥。可以在動物和一部分人類中誘導移植耐受性，并且可以長期接受同種異體移植物而無需維持免疫抑制。然而，移植排斥可能在獲得移植耐受狀態很久之后發生。當這種同種異體移植物被拒絕時，假定同種異體致敏規則適用于非耐受宿主，并且免疫耐受性喪失。我們使用心臟移植的小鼠模型表明，當單核細胞增生李斯特菌感染導致急性排斥反應時，因此廢除移植耐受性，供體特異性耐受狀態重新出現，允許自發接受供體匹配的第二次移植。這些數據表明，同種異體移植耐受的記憶勝過移植排斥的記憶。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

Ballesteros-Tato, A. 等。(2014)。“通過抗原呈遞到流感特異性 CD8(+) T 細胞的不同持續時間對記憶編程的表位特異性調節。" 豁免 41(1)：127-140。

記憶 CD8(+) T 細胞在初級反應期間被編程，以獲得穩健的次級反應。在這里，我們顯示 CD8(+) T 細胞對流感病毒的不同表位作出反應，在初級反應期間收到了質上不同的信號，從而改變了它們的次級反應性。核蛋白 (NP) 特異性 CD8(+) T 細胞在初級反應的后期遇到 CD40 許可、CD70 表達、CD103(-)CD11b(hi) 樹突狀細胞 (DC) 上的抗原。因此，它們維持 CD25 表達并對白細胞介素 2 (IL-2) 和 CD27 做出反應，這兩者共同編程了它們強大的二次增殖能力和干擾素-γ (IFN-γ) 產生能力。相比之下，聚合酶 (PA) 特異性 CD8(+) T 細胞在初級反應的后期沒有遇到攜帶抗原的、CD40 激活的 DC，沒有接受 CD27 和 CD25 信號，也沒有被編程為具有強大增殖和細胞因子產生能力的記憶 CD8(+) T 細胞。因此，CD8(+) T 細胞響應豐富的抗原，如 NP，主導了二次反應。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

• CD40/CD40L 信號的體外阻斷

Krummey, SM, 等。(2014)。“與 Th1 細胞相比，念珠菌引起的鼠 Th17 細胞表達高 Ctla-4，并且對共刺激阻斷具有抗性。" J Immunol 192(5): 2495-2504。

效應和記憶 T 細胞可能與同種異體 Ag 發生交叉反應以介導移植排斥。盡管對 Th1 細胞的共刺激特性進行了充分研究，但對微生物引發的 Th17 細胞的共刺激要求知之甚少。共刺激阻滯劑 CTLA-4 Ig 在治療幾種 Th17 驅動的自身免疫性疾病方面無效，并且與腎移植后的嚴重急性排斥有關，導致我們研究 Th17 細胞是否在 CD28/CTLA-4 阻滯抵抗中起作用異體反應。我們建立了一個 Ag 特異性模型，其中 Th1 和 Th17 細胞分別通過結核分枝桿菌和白色念珠菌免疫引起。C。白色念珠菌免疫引起更高頻率的 Th17 細胞，并賦予移植后對共刺激阻斷的抗性。與結核分枝桿菌組相比，白色念珠菌誘導的 Th17 細胞含有較高頻率的 IL-17(+)IFN-γ(+) 生產者和較低頻率的 IL-10(+) 和 IL-10(+) )IL-17(+) 細胞。重要的是，Th17 細胞差異調節 CD28/CTLA-4 通路，與 Th1 細胞相比，表達同樣高的 CD28，但 CTLA-4 的量顯著增加。離體阻斷實驗表明 Th17 細胞對 CTLA-4 共抑制更敏感，因此對 CTLA-4 Ig 不太敏感。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

馬歇爾，D.，等。(2014)。“胸腺調節性 T 細胞分叉發育期間對 IL-2 和 IL-15 的不同需求。" 免疫學雜志 193(11)：5525-5533。

尚未*了解胸腺中調節性 T 細胞 (T(reg)) 生成的發育途徑。在這項研究中，我們用四環素誘導的 Zap70 轉基因重組了 Zap70 缺陷胸腺細胞的胸腺發育，以允許 T(reg) 發育的時間解剖。我們發現 T(reg) 以*的動力學發展，首先出現在 CD4 單陽性 (SP) 胸腺細胞中的第 4 天。CD25(+)Foxp3(+) T(reg) 選擇的*模型建議通過 CD25(+)Foxp3(-) CD4 SP 前體進行開發。相比之下，我們的動力學分析顯示存在豐富的 CD25(-)Foxp3(+) 細胞，這些細胞在響應 IL-2 時非常有效地成熟為 CD25(+)Foxp3(+) 細胞。CD25(-)Foxp3(+) 細胞在發展動力學和自身肽MHC 的親和力方面更接近成熟的T(reg)。這些群體在發育過程中也表現出對細胞因子的不同需求。CD25(-)Foxp3(+) 細胞依賴于 IL-15，而 CD25(+)Foxp3(+) 的產生則特別需要 IL-2。最后，我們發現 IL-2 和 IL-15 來自體內不同的來源。IL-15 是基質來源的，而 IL-2 僅來自依賴完整 CD4 譜系發育的造血細胞，而不是經歷 Ag 的細胞或 NKT 細胞。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

Baumjohann, D. 等。(2013)。“持久性抗原和生發中心 B 細胞維持 T 濾泡輔助細胞反應和表型。" 免疫 38(3)：596-605。

T 濾泡輔助 (Tfh) 細胞為 B 細胞提供幫助，對于生發中心 (GC) 反應的建立至關重要，包括產生高親和力抗體和記憶 B 細胞和長壽漿細胞。在這里，我們報告 Tfh 細胞反應的大小由抗原量決定，并與 GC B 細胞反應的大小直接相關。此外，維持 Tfh 細胞表型需要 GC B 細胞持續的抗原刺激。在淋巴細胞減少的情況下，強烈且持續的 Tfh 細胞反應導致旁觀者 B 細胞激活、高丙種球蛋白血癥以及多反應性抗體和自身反應性抗體的產生。這些數據表明抗原劑量決定了 Tfh 細胞反應和 GC 反應的大小和持續時間，

• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

Hofstetter，AR 等。(2012)。“MHC Ib 類限制性 CD8 T 細胞在小鼠多瘤病毒感染過程中依賴于 CD4 T 細胞幫助和 CD28 共刺激而有所不同。" 免疫學雜志 188(7)：3071-3079。

我們最近發現了一種保護性 MHC Ib 類限制性 CD8 T 細胞對小鼠多瘤病毒感染的反應。這些 CD8 T 細胞識別來自 VP2 病毒衣殼蛋白的 aa 139-147 的肽，該肽與非多態性 H-2Q9 分子結合，該分子是與β(2)m 相關的 MHC Ib 類分子的 Qa-2 家族的成員。Q9：VP2.139 特異性 CD8 T 細胞表現出不尋常的通貨膨脹反應，其特征是在 3 個月內逐漸擴張，然后是穩定的維持階段。我們之前已經證明 Q9:VP2.139 特異性 CD8 T 細胞依賴于 Ag 進行擴增，但不依賴于長期維持。在這項研究中，我們檢驗了 Q9:VP2.139 特異性 T 細胞反應的擴增和維持成分不同地依賴于 CD4 T 細胞幫助和 CD28 共刺激的假設。CD4(+) 細胞和 CD28/CD40L 消耗削弱了 Q9:VP2.139 特定 CD8 T 細胞的擴張，并且內在的 CD28 信號足以進行擴張。相比之下，CD4 T 細胞不足，而不是 CD28/CD40L 阻斷，導致 Q9:VP2.139 特異性 CD8 T 細胞在維持階段的頻率下降。這些結果表明 Q9:VP2.139 特異性 CD8 T 細胞對小鼠多瘤病毒感染的反應依賴于 CD4 T 細胞幫助和 CD28 共刺激以促進膨脹，但僅依賴于 CD4 T 細胞幫助維持。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

泰勒、JJ 等人。(2012)。“一種不依賴生發中心的途徑在初級反應的早期產生未轉換的記憶 B 細胞。" J Exp Med 209(3): 597-606。

記憶 B 細胞可以從經典的生發中心 (GC) 途徑或不太了解的 GC 獨立途徑產生。我們使用基于抗原的細胞富集來評估這些途徑對多克隆記憶 B 細胞庫的相對貢獻。我們確定了一個 CD38(+) GL7(+) B 細胞前體群體，它以響應強 CD40 刺激的 GC 獨立方式直接分化為 IgM(+) 或同種型轉換 (sw) Ig(+) 記憶 B 細胞。或者，CD38(+) GL7(+) B 細胞前體有可能成為 Bcl-6(+) GC 細胞，然后主要生成 swIg(+) 記憶 B 細胞。這些結果表明早期 IgM(+) 和 swIg(+) 記憶 B 細胞是獨立于 GC 的途徑的產物，而后來切換的 Ig(+) 記憶 B 細胞是 GC 細胞的產物。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內阻斷

西、EE 等。(2011)。“記憶 CD8(+) T 細胞的嚴格調節限制了它們在持續高病毒載量期間的有效性。" 豁免 35(2)：285-298。 

要設計成功的慢性病疫苗，了解記憶 CD8(+) T 細胞對持久性抗原再刺激的反應至關重要。然而，大多數比較記憶和初始細胞反應的研究僅在快速清除的急性感染中進行。在此，通過比較記憶和幼稚 CD8(+) T 細胞對急性和慢性淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒感染的反應，我們表明記憶細胞在幼稚細胞上占主導地位，并且在存在足夠數量時具有保護作用，可以快速減少感染。相反，當感染沒有迅速減少時，由于高抗原負荷或持續存在，記憶細胞會迅速丟失，這與幼稚細胞不同。這種記憶細胞的喪失是由于抑制細胞增殖、抑制性受體 2B4 的選擇性調節、并增加對 CD4(+) T 細胞幫助的依賴。因此，強調設計能引發有效 CD4(+) T 細胞幫助和快速控制感染的疫苗的重要性。